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從 0 到 1 教你!冷凍研磨儀處理宮頸組織樣品的正確知識

  今天和大家分享一次超實用的宮頸組織樣品前處理過程!在分子生物學(xué)實驗中,樣本前處理直接影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,這次用到的冷凍研磨儀簡直是 “神助攻”!

  材料準(zhǔn)備清單:

  冷凍研磨儀:實驗的核心設(shè)備,低溫環(huán)境能有效保護樣品生物活性

冷凍研磨儀

冷凍研磨儀 JXFSTPRP-CLN

  Trizol:核酸提取的關(guān)鍵試劑,能高效裂解細胞

  宮頸組織:本次實驗的主角,不同樣本特性決定處理方法

  研磨珠、研磨管:輔助研磨,幫助充分破碎組織

  詳細實驗步驟:

  儀器預(yù)冷:實驗前將冷凍研磨儀預(yù)冷至 - 20℃,這一步非常重要!低溫環(huán)境能最大限度保留樣品中的生物活性物質(zhì),保證后續(xù)實驗的可靠性。

  樣品預(yù)處理:由于宮頸組織中結(jié)締組織含量較高,直接研磨效果不好。我先用手術(shù)剪將樣品仔細剪碎,再放入 2ml 研磨管,加入適量研磨珠和核酸提取液 Trizol,采用濕磨的方式進行處理。

  設(shè)置研磨參數(shù):把研磨儀頻率設(shè)為 60Hz,研磨時間 60 秒。這個參數(shù)是我多次實驗總結(jié)出來的,能讓組織研磨得既充分又不會過度破壞樣本。

  室溫靜置:研磨完成后,將樣品在室溫(15℃-30℃)下放置 5 分鐘,讓核酸蛋白復(fù)合物充分分離,為后續(xù)提取做準(zhǔn)備。

  加入氯仿萃?。好?1ml Trizol 對應(yīng)加入 0.2ml 氯仿,劇烈振蕩 15 秒后,室溫靜置 3 分鐘。這一步能有效分層,便于后續(xù)分離。

  低溫離心:最后在 4℃環(huán)境下進行離心操作,分離出上清液和沉淀物,上清液中就含有我們需要的核酸啦!

  實驗效果:

4-30- 實驗案例底圖.jpg

宮頸組織研磨前后效果對比圖

  實驗小貼士:

  儀器配平:使用冷凍研磨儀和離心機時,一定要注意配平!否則不僅影響實驗結(jié)果,還可能損壞儀器。

  規(guī)范操作:整個實驗過程最好在通風(fēng)柜中進行,Trizol 和氯仿都具有一定揮發(fā)性,保護自己才能更好地做實驗!

  低溫保護:盡量全程保持低溫環(huán)境,防止樣品失活,從預(yù)冷儀器到低溫離心,每一步都不能馬虎!

  希望這次的分享能給做相關(guān)實驗的小伙伴帶來幫助~通過本次實驗,清晰展現(xiàn)了冷凍研磨儀在宮頸組織樣品前處理中的高效與可靠。從預(yù)冷準(zhǔn)備到參數(shù)設(shè)置,每一個環(huán)節(jié)都至關(guān)重要。后續(xù)還將圍繞不同樣本特性及實驗需求,繼續(xù)探索冷凍研磨儀的更多應(yīng)用可能,期待為大家?guī)砀鄬嵱玫目蒲薪?jīng)驗分享!

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